WCG : Le projet de recherche de médicaments pour la leishmaniose poursuit sa quête de meilleurs traitements

Récapitulatif
Les chercheurs de Drug Search for Leishmaniasis ont récemment effectué des tests en laboratoire sur 10 composés. Les tests ont montré qu'aucun des composés n'était un bon traitement potentiel, et les chercheurs porteront leur attention sur des composés supplémentaires.

Les phlébotomes, comme le P. papatasi illustré ci-dessus, sont responsables de la propagation de la leishmaniose.

Brève description des dernières découvertes de l'équipe

La leishmaniose est l'une des maladies tropicales les plus négligées au monde, infectant plus de deux millions de personnes dans 98 pays. Les traitements actuels pour toutes les formes de leishmaniose peuvent provoquer des effets secondaires graves, y compris la mort. De plus, les parasites résistants aux médicaments posent de gros problèmes dans de nombreux pays. Pour ces raisons, il existe un besoin urgent de nouveaux composés médicamenteux sûrs et peu coûteux.

L'équipe Recherche de drogue pour la leishmaniose a poursuivi ses tests en laboratoire depuis sa dernière mise à jour . La dernière série de tests a impliqué 10 composés qui avaient été identifiés comme pouvant être des traitements plus sûrs et plus efficaces.

Les composés ont d'abord été testés pour leur toxicité, puis pour leur efficacité contre deux parasites courants qui peuvent provoquer la leishmaniose. Sur la base des tests, aucun des composés testés ne serait un traitement efficace de la maladie.

Les chercheurs rendront publics ces résultats, comme ils l'ont fait avec leurs données à ce jour. Cela alertera d'autres scientifiques sur la forte possibilité que ces composés particuliers ne soient pas efficaces contre la leishmaniose, et les aidera à prendre des décisions sur les tests d'autres composés. Une fois que l'équipe aura obtenu un financement supplémentaire, elle testera d'autres composés qui pourraient être utiles dans le traitement de la leishmaniose.

Toute personne intéressée par une description scientifique complète de cette dernière série de tests peut lire ci-dessous. Merci à tous ceux qui ont soutenu ce projet.

Évaluation in vitro de l'activité anti-leishmaniale des molécules prédites par amarrage

Afin de déterminer si des molécules prédites in silico avec une activité leishmanicide potentielle pourraient avoir la possibilité de passer à des tests in vivo , les molécules doivent d'abord passer des tests de cytotoxicité contre des cellules humaines in vitro . Ensuite, ces molécules qui présentent une cytotoxicité faible ou nulle sont évaluées pour l'inhibition de la croissance des parasites dans les macrophages humains et la concentration efficace 50 (CE ₅₀ ). L'EC ₅₀ est la concentration d'une molécule qui tue 50% des parasites in vitro .

Évaluation de la cytotoxicité

L'activité cytotoxique des composés a été évaluée sur la lignée cellulaire humaine U937 (CRL-1593-2 ™ d'ATCC). Pour les évaluations, les cellules ont été utilisées en phase de croissance logarithmique et ont été cultivées dans des plaques de culture à 96 puits, à une concentration de 100 000 cellules / mL pour U937 dans du milieu RPMI-1640 additionné de 10% de sérum bovin fœtal (SFB) et 1 % d'antibiotiques (pénicilline-streptomycine) (Sigma). Six dilutions en série préparées à partir de chacune des concentrations suivantes: 200 - 100 - 50 - 25,0 et 1 μg / mL ont été effectuées selon le composé à évaluer. Les cellules ont été incubées à 37 ° C avec 5% de CO ₂pendant 72 heures en présence des composés et, par la suite, l'effet a été déterminé en utilisant la méthode enzymatique MTT. Cette méthode utilise un colorant qui métabolise les cellules vivantes en réduisant la coloration, qui est mesurée en "densité optique" (DO). Les plaques ont été incubées à température ambiante pendant 30 minutes supplémentaires et la production de formazan (changement de couleur) a été mesurée à 570 nm dans un spectrophotomètre. Pour contrôler la viabilité, des cellules cultivées dans les mêmes conditions d'incubation ont été utilisées en l'absence des composés. La doxorubicine a été utilisée comme contrôle de la cytotoxicité.

La cytotoxicité a été déterminée en fonction du pourcentage de diminution de la viabilité et donc de la diminution du nombre de cellules obtenues pour chaque composé et la doxorubicine, en fonction des valeurs de DO obtenues dans chaque condition expérimentale. La diminution de la viabilité cellulaire a été calculée en utilisant les valeurs de DO ???? pour chaque condition, c'est-à-dire le composé ou le contrôle à la concentration évaluée, en utilisant l'équation suivante:% Viabilité = [cellules OD exposées au composé ou cellule témoin / OD cellules non exposées] × 100). Les valeurs de DO obtenues pour les cellules en l'absence de composés correspondent à 100% de viabilité ou cellules vivantes. Ensuite, avec les pourcentages de viabilité, le pourcentage de mortalité a été calculé, ce qui correspond à 100% de viabilité. Avec les pourcentages de mortalité, concentration létale 50 (CL ₅₀) a été calculé par le programme Probit3. La cytotoxicité de chaque composé a été classée selon les valeurs de CL ₅₀ ???? en utilisant une échelle exclusive: LC _{50 de} cytotoxicité élevée <50 μg / mL; cytotoxicité modérée: 50 <CL ₅₀ <200 μg / mL et faible cytotoxicité: LC ₅₀ > 200 μg / mL.

Le tableau 1 montre les résultats de la cytotoxicité, où il est observé qu'un composé a montré une faible cytotoxicité tandis que trois avaient une cytotoxicité modérée pour la lignée cellulaire humaine U937. Comme prévu, la doxorubicine, incluse comme contrôle de toxicité, a montré une cytotoxicité élevée.

Tableau 1. Évaluation de la cytotoxicité in vitro

Évaluation de l'activité anti-leishmaniale

Avant la détermination de la concentration efficace 50 (CE ₅₀ ), tous les composés ont été présélectionnés, en évaluant l'effet sur le pourcentage d'infection chez les amastigotes intracellulaires dans la lignée cellulaire U-937 par rapport aux témoins amastigotes, en l'absence de le composé.

Dans ce test d'activité leishmanicide in vitro , les souches fluorescentes de Leishmania panamensis (UA140-pIR (-) - eGFP) et Leishmania braziliensis (UA301-pIR (-) - eGFP) ont été utilisées.

L'activité des composés a été évaluée sur des parasites intracellulaires (stade amastigote) obtenus après infection in vitro de macrophages. Les cellules U-937 ont été infectées par des promastigotes fluorescents en phase de croissance stationnaire dans un rapport parasite: cellule de 30: 1 pour la souche Leishmania panamensis UA140 et de 20: 1 pour Leishmania braziliensisSouche UA301. Les cellules infectées ont été exposées à différentes concentrations des composés pendant 72 heures (voir les concentrations utilisées pour chaque composé, dans une note sous le tableau 2). Comme contrôle de l'infection, des cellules infectées ont été utilisées en l'absence des composés et l'amphotéricine B a été utilisée comme contrôle positif. Après 72 heures d'incubation, les cellules ont été soigneusement retirées du fond de la boîte et analysées dans un cytomètre en flux, lisant à une excitation de 488 nm et une émission de 525 nm avec un laser Argon4.

L' activité anti- Leishmania a été déterminée en fonction de la charge parasitaire, qui est le nombre de parasites dans les cellules infectées exposés à la concentration sélectionnée pour chaque composé ou amphotéricine B. La diminution de la charge parasitaire, appelée inhibition de l'infection, a été calculée en utilisant la fluorescence valeurs d'intensité moyenne ???? (MFI) et en utilisant la formule suivante:% d'infection = [cellules MFI infectées et exposées au composé ou à l'amphotéricine B / MFI infectées de cellules non exposées] × 100). Les valeurs MFI obtenues pour les cellules infectées en l'absence de médicament ou de composé correspondent à 100% de l'infection. À son tour, le pourcentage d'inhibition de l'infection correspond à 100% de l'infection -% d'infection en présence du composé.

Tableau 2. Évaluation du pourcentage d'inhibition obtenu avec les composés testés chez les parasites intracellulaires.

La CE ₅₀ n'a été déterminée pour aucune des molécules, car aucun des composés n'a montré un pourcentage d'inhibition supérieur à 50% dans les deux espèces de Leishmania utilisées (voir tableau 2).

Conclusion

Aucune des 10 molécules évaluées n'a montré de résultats anti-leishmaniaux prometteurs sur la base des tests d'inhibition de la cytotoxicité in vitro. Et compte tenu de cela, la CE ₅₀ n'a pas été évaluée.

traduction de l'article du site WCG : https://www.worldcommunitygrid.org/about_us/viewNewsArticle.do?articleId=556